cccc55(对虾孢子虫用什么设备检测)
资讯
2023-11-07
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1. cccc55,对虾孢子虫用什么设备检测?
我们应用PCR技术,放大EHP的18SrRNA基因,再用标记地可辛的探针探测原位杂交细胞中被感染的EHP,最后开发新的PCR技术探测对虾组织,排泄物和水中的EHP。
2.材料和方法
2.1对虾
2006年在文莱收集了感染对虾肠孢子虫(EHP)的南美兰对虾。2014年和2015年在越南虾塘里收集了感染EHP的南美白对虾。2014年,从泰国运送了一批南美兰对虾到我们亚利桑那大学的实验室进行隔离检测,这些对虾后来被检测出感染了EHP,它们的肝胰腺,排泄物和水进行了PCR技术取样检测。
为了检测原位杂交(ISH),并通过PCR技术分析EHP的特异性,研究人员使用了具有棉虾病临床症状的斑节对虾样本,这些对虾来自2005年(固定组织)和2006年(冰冻组织)的马达加斯加。还使用了感染了鳄组织变形虫的南美白对虾,这些虾是在2014年收集到的。通过PCR技术分析,肝胰腺组织或者整只对虾被保护在95%的酒精当中或被风干后送往我们实验室。通过原位杂交技术,用戴维森固定法将虾固定。
2.2.DNA提取
从感染EHP的对虾中去除肝胰腺,(4-5只虾)放进一个样本中。装运感染EHP的对虾的虾槽中对排泄物和水进行了取样。利用MicrosepAdvance离心装置(PALL公司)将虾槽里的水浓缩150倍,用于DNA提取。用一种高纯度DNA模板制备工具(RocheBioscience)或Maxwell-16Cell LEV DNA纯化试剂盒(Promega)。
为了测试EHP引物的特异性,PCR扩增检测两种寄生虫病中的DNA:
(1)棉虾病,2006年从马达加斯加收集了斑节对虾,这些虾的肌肉变白,通过rRNA基因测序,发现它们的DNA呈阴性,因为内有类似于匹里虫的微孢子虫(GenBankkp825331号);
(2)变形虫病,这些南美白对虾大量死亡,通过组织学检查,最后发现这些虾感染了变形虫(种类不确定)。
为了保证EHP引物没有宿主基因组的反应,制备DNA模板:
(1)来自美国夏威夷的无特定病原(SPF)的南美白对虾(>10样本)、斑节对虾(3个样本);
(2)来自沙特阿拉伯的印度对虾(2个样本);
(3)在新喀里多尼亚养殖的南美兰对虾(2个样本);
(4)来自菲律宾的罗氏沼虾(2个样本);
(5)沙特阿拉伯附近虾塘里采集的蟹(7个样本,未知的物种);
(6)多毛类(3个样本),卤虫生物量(9个样本),鱿鱼(2个样本),磷虾(2个样本),这些是从各种商业供应商运送。
2.3.18S rRNA基因扩增和克隆
PCR检测技术,使用了PuReTaqReady-To-Go珠(GE医疗)。扩增18SrRNA基因的引物18S-F(5’-CACCAGGTTGATTCTGCCTGA)和18S-R(5’-TCTGAAATAGTACGGGCGG)。PCR反应中包含200微米dNTP,0.2微米引物,10mM Tris-HCl(pH9.0),50毫米氯化钾,1.5毫米氯化镁,2.5U Taq DNA聚合酶和1微升提取的DNA(10纳克至100纳克每微升)。放大进行下列循环参数:到达94°C进行初始化3分钟,然后94°C温度下进行30秒,55°C温度下进行30秒,72°C温度下进行1分钟,做35个此循环周期,并在最后一个周期停留在72°C温度下5分钟。在一个含有溴化乙锭的1.2%琼脂糖凝胶中电泳分析PCR产物。在?1KB一带切除和提取DNA,克隆到pGEM-T-easy载体(Promega)上,命名为克隆pEHP-1。通过DNA测序,克隆的插入为1146bp(GenBankNo.kp759285)。国家生物技术信息中心(NCBI)使用BLAST序列数据库对GenBank的相似序列进行了搜索。
2.4、探针标记和原位杂交
克隆pEHP-1质粒DNA被用来做成原位杂交时的一个探针。Mari等人描述,在PCR反应中,使用了digoxigenin-11-dutp(Roche)标记的基因探针(1998)。用于标记反应的引物EHP-F(5’-GGGAACGACGAACGGCTCAG)和EHP-R1(5’-TGCCTTGATGAGACACTGTT)产生一个1.1 kb的片段。digoxigenin标记的DNA探针,用乙醇沉淀,悬浮在水中,并存储在-20°C。棉虾病,感染了类似于匹里虫的微孢子虫的探针如微孢子虫,是从一个克隆的16SRNA基因区域产生。
戴维森的AFA固定虾进行了处理,石蜡包埋,按照标准方法切片(4微米厚)(莱特纳,1996)。经过脱蜡,水化,蛋白酶K消化,和后固定,切片浸泡在用500微升的杂交液中(4×SSC,50%甲酰胺,1×登哈特的溶液,5%硫酸葡聚糖,0.5微克/毫升鲑鱼精DNA),这种杂交液中含有EHP探针含(0.2μg/ml)。切片放在90°C加热表面上10min,然后在42°C温度下进行一夜的杂交。最终采用硝基蓝四氮唑,5-溴-4-磷酸进行检测抗地高辛抗体共轭碱性磷酸酶(罗氏)。
2.5.EHP的PCR检测。
PCR检测技术,使用了PuReTaqReady-To-Go珠(GE医疗)。探测EHP的引物是EHP-510F(5’-GCCTGAGAGATGGCTCCCACGT)和EHP-510R(5’-GCGTACTATCCCCAGAGCCCGA)。放大进行下列循环参数:到达94°C进行初始化3分钟,然后94°C温度下进行30秒,60°C温度下进行30秒,72°C温度下进行30秒,做35个此循环周期,并在最后一个周期停留在72°C温度下5分钟。
3.结论与讨论
3.1临床症状与EHP感染史
目前,养殖对虾过程中所发生的EHP感染还没有特定的的临床症状。EHP感染通常与发育不良和死亡率上升有关。根据越南境内的鱼塘数据(虾农个人提供的数据):把感染后的虾苗放入虾塘后的前25天时间内,对虾生长速度正常,之后,对虾的健康状况开始恶化;受感染的对虾饲料进食量减少(50-70%),肝胰脏变色。对虾受到感染之后,其体型(即重量,每周进行一次称重)仅为健康对虾的10-40%。对虾EHP感染死亡率并非一成不变,根据养殖场统计,对虾每天的死亡率约为1?2%。在实验室测定过程中,对虾EHP死亡率并无显著上升,(Tangprasittipap,2013),由于测定持续周期较短(7天),有可能无法检测出死亡率的大幅变化。情况较为严重的EHP感染可能会增加其他细菌感染的易感性。我们发现,在某些情况下,EHP通常伴有弧菌机会性感染(也称为感染性肝胰腺坏死),这可能会导致增加对虾死亡率。
2. java面试题有哪些?
虽然现在大厂内卷现象泛滥,而且996的传统依旧肆虐。但没有哪位程序员能架得住互联网大厂的高薪职位诱惑。特别是我还有一位在阿里工作7年多的老表,在其耳旁风之下,不断将大厂描绘的美丽风景刻画在我脑海中,也让我一直有着想进大厂镀金的梦想。
所以为了完成这次进大厂的梦想,前段时间特意拜托老表爆肝一周之后,才梳理好的这份10W字的“Java高级程序员面试精华题”也帮助我在金三银四的最后时段赶上了跳槽季的末班车,成功入职字节!
虽然金三银四黄金跳槽期虽然已过,如果你现在还想跳槽进入大厂,后面的金九银十也不失为一个好机会。利用这4-5个月的时间里好好储备下技术能力,刷一刷面试题。也为跳槽作一作万全准备。
现在我把这份文档分享出来给每位看到的有缘人,为大家节省一点找资料、翻文献、刷题的时间。
面试文档涵盖:微服务、分布式中间件、并发编程、数据库,Spring/MyBatis/Netty等主流框架,需要的小伙伴转发+关注我后直接私信【666】即可获取资料免费下载方式!
主目录展示:常用主流框架篇涵盖Srping、MyBatis、Netty
微服务篇涵盖Spring Boot、Dubbo、Spring Cloud及Spring Cloud相关组件原理
并发编程篇涵盖并发编程所有技术点的面试
分布式中间件合集涵盖RPC框架、Zookeeper、Redis、Nginx、RabbitMQ、Kafka、MongDB、Memcached。
性能调优合集涵盖JVM、MySql、Tomcat
需要文档的小伙伴转发+关注我后直接私信【666】即可获取资料免费下载方式!
3. 蜀门神灵蛋的特点?
蜀门神灵蛋怎么获得
最开始的时候50级时在神灵管理员那里能接到一个任务,打45本的BOSS,然后可以从三个神灵里自选一个,都是凡品蛋,攻击属性和评价都是随机的,最高评价是D。 还有就是可以通过打副本,45、55、60、61(这4个本最常见)打宝模式下,击倒BOSS后BOSS会有非常小的概率召唤一个元神,这个元神肯定是该副本中的BOSS元神,至于是哪个就是随机的了。
击倒BOSS元神后会掉落神灵蛋(凡品还是上品看运气)。 最后就是到市场上买了。凡品蛋非常便宜,老区1-3金,新区可能能到8-10金;上品蛋老区也很便宜,大概50金左右,新区比较离谱,100-300不等。
蜀门ol神灵蛋怎么用
得到聚元灵宝后右键打开,然后把神灵蛋拖拽到任意一个框框里就行了。用的时候点下面的“召唤”就能召唤出神灵了。
新蜀门神灵系统养成攻略
1基本条件:50级及以上的玩家可以到成都城的“神灵管理员”(坐标306 -605)处接取神灵系列任务。完成任务后可获得元神法宝“聚元灵宝”、神灵蛋等丰富奖励。要注意的是,玩家必须元神等级达到15级或以上才可完成任务(元神力任务和pve保护头陀任务完成)。
2聚元灵宝的获取:找到“神灵管理员”右键对话,接任务,并免费获取“聚元灵宝”
3:聚元灵宝的装备:将“聚元灵宝”装备在主法宝左侧的装备栏中,即可看到后续任务并得到奖励。然后通过完成45任务可以免费获得一个凡品神灵蛋,右键点击后放入神灵蛋即可。
好品质的神灵蛋:上品神灵,可以通过击杀45、55、60打宝模式副本中的BOSS后,有几率得到。
4:神灵需要设置自动召唤,装备上拥有神灵的聚元灵宝,右击法宝或使用角色→动作里的聚元灵宝快捷键打开聚元灵宝界面选中神灵后,点击召唤按钮即可召出神灵协助玩家战斗(图中所示界面)。
通过召唤神灵,聚元灵宝每1分钟获得6点修为值,通过召唤神灵每天所获得的修为值最多1200点。不推荐使用修为灵丹这种难得的妙丹增加聚元灵宝的修为(除非你着急升级,不惜金钱),
每天只能获得最多2000点的修为值,所以看好吃灵丹的时间。
5:神灵属性点分配:每升一级都将获得5个潜能点,升级神灵的时候注意潜能点的分配,攻击分配有上限,需要注意,不能都分配到攻击上,合理分配到防御上。
6:神灵的外观及属性,其实根据自身喜好即可,和人物无必然关系。凡品神灵的属性评价资质由低至高是F、E、D(凡品最好的也就是DDDD)。而上品神灵的属性评价资质由低至高是E、D、C(上品最好的也就是CCCC)。
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1. cccc55,对虾孢子虫用什么设备检测?
我们应用PCR技术,放大EHP的18SrRNA基因,再用标记地可辛的探针探测原位杂交细胞中被感染的EHP,最后开发新的PCR技术探测对虾组织,排泄物和水中的EHP。
2.材料和方法
2.1对虾
2006年在文莱收集了感染对虾肠孢子虫(EHP)的南美兰对虾。2014年和2015年在越南虾塘里收集了感染EHP的南美白对虾。2014年,从泰国运送了一批南美兰对虾到我们亚利桑那大学的实验室进行隔离检测,这些对虾后来被检测出感染了EHP,它们的肝胰腺,排泄物和水进行了PCR技术取样检测。
为了检测原位杂交(ISH),并通过PCR技术分析EHP的特异性,研究人员使用了具有棉虾病临床症状的斑节对虾样本,这些对虾来自2005年(固定组织)和2006年(冰冻组织)的马达加斯加。还使用了感染了鳄组织变形虫的南美白对虾,这些虾是在2014年收集到的。通过PCR技术分析,肝胰腺组织或者整只对虾被保护在95%的酒精当中或被风干后送往我们实验室。通过原位杂交技术,用戴维森固定法将虾固定。
2.2.DNA提取
从感染EHP的对虾中去除肝胰腺,(4-5只虾)放进一个样本中。装运感染EHP的对虾的虾槽中对排泄物和水进行了取样。利用MicrosepAdvance离心装置(PALL公司)将虾槽里的水浓缩150倍,用于DNA提取。用一种高纯度DNA模板制备工具(RocheBioscience)或Maxwell-16Cell LEV DNA纯化试剂盒(Promega)。
为了测试EHP引物的特异性,PCR扩增检测两种寄生虫病中的DNA:
(1)棉虾病,2006年从马达加斯加收集了斑节对虾,这些虾的肌肉变白,通过rRNA基因测序,发现它们的DNA呈阴性,因为内有类似于匹里虫的微孢子虫(GenBankkp825331号);
(2)变形虫病,这些南美白对虾大量死亡,通过组织学检查,最后发现这些虾感染了变形虫(种类不确定)。
为了保证EHP引物没有宿主基因组的反应,制备DNA模板:
(1)来自美国夏威夷的无特定病原(SPF)的南美白对虾(>10样本)、斑节对虾(3个样本);
(2)来自沙特阿拉伯的印度对虾(2个样本);
(3)在新喀里多尼亚养殖的南美兰对虾(2个样本);
(4)来自菲律宾的罗氏沼虾(2个样本);
(5)沙特阿拉伯附近虾塘里采集的蟹(7个样本,未知的物种);
(6)多毛类(3个样本),卤虫生物量(9个样本),鱿鱼(2个样本),磷虾(2个样本),这些是从各种商业供应商运送。
2.3.18S rRNA基因扩增和克隆
PCR检测技术,使用了PuReTaqReady-To-Go珠(GE医疗)。扩增18SrRNA基因的引物18S-F(5’-CACCAGGTTGATTCTGCCTGA)和18S-R(5’-TCTGAAATAGTACGGGCGG)。PCR反应中包含200微米dNTP,0.2微米引物,10mM Tris-HCl(pH9.0),50毫米氯化钾,1.5毫米氯化镁,2.5U Taq DNA聚合酶和1微升提取的DNA(10纳克至100纳克每微升)。放大进行下列循环参数:到达94°C进行初始化3分钟,然后94°C温度下进行30秒,55°C温度下进行30秒,72°C温度下进行1分钟,做35个此循环周期,并在最后一个周期停留在72°C温度下5分钟。在一个含有溴化乙锭的1.2%琼脂糖凝胶中电泳分析PCR产物。在?1KB一带切除和提取DNA,克隆到pGEM-T-easy载体(Promega)上,命名为克隆pEHP-1。通过DNA测序,克隆的插入为1146bp(GenBankNo.kp759285)。国家生物技术信息中心(NCBI)使用BLAST序列数据库对GenBank的相似序列进行了搜索。
2.4、探针标记和原位杂交
克隆pEHP-1质粒DNA被用来做成原位杂交时的一个探针。Mari等人描述,在PCR反应中,使用了digoxigenin-11-dutp(Roche)标记的基因探针(1998)。用于标记反应的引物EHP-F(5’-GGGAACGACGAACGGCTCAG)和EHP-R1(5’-TGCCTTGATGAGACACTGTT)产生一个1.1 kb的片段。digoxigenin标记的DNA探针,用乙醇沉淀,悬浮在水中,并存储在-20°C。棉虾病,感染了类似于匹里虫的微孢子虫的探针如微孢子虫,是从一个克隆的16SRNA基因区域产生。
戴维森的AFA固定虾进行了处理,石蜡包埋,按照标准方法切片(4微米厚)(莱特纳,1996)。经过脱蜡,水化,蛋白酶K消化,和后固定,切片浸泡在用500微升的杂交液中(4×SSC,50%甲酰胺,1×登哈特的溶液,5%硫酸葡聚糖,0.5微克/毫升鲑鱼精DNA),这种杂交液中含有EHP探针含(0.2μg/ml)。切片放在90°C加热表面上10min,然后在42°C温度下进行一夜的杂交。最终采用硝基蓝四氮唑,5-溴-4-磷酸进行检测抗地高辛抗体共轭碱性磷酸酶(罗氏)。
2.5.EHP的PCR检测。
PCR检测技术,使用了PuReTaqReady-To-Go珠(GE医疗)。探测EHP的引物是EHP-510F(5’-GCCTGAGAGATGGCTCCCACGT)和EHP-510R(5’-GCGTACTATCCCCAGAGCCCGA)。放大进行下列循环参数:到达94°C进行初始化3分钟,然后94°C温度下进行30秒,60°C温度下进行30秒,72°C温度下进行30秒,做35个此循环周期,并在最后一个周期停留在72°C温度下5分钟。
3.结论与讨论
3.1临床症状与EHP感染史
目前,养殖对虾过程中所发生的EHP感染还没有特定的的临床症状。EHP感染通常与发育不良和死亡率上升有关。根据越南境内的鱼塘数据(虾农个人提供的数据):把感染后的虾苗放入虾塘后的前25天时间内,对虾生长速度正常,之后,对虾的健康状况开始恶化;受感染的对虾饲料进食量减少(50-70%),肝胰脏变色。对虾受到感染之后,其体型(即重量,每周进行一次称重)仅为健康对虾的10-40%。对虾EHP感染死亡率并非一成不变,根据养殖场统计,对虾每天的死亡率约为1?2%。在实验室测定过程中,对虾EHP死亡率并无显著上升,(Tangprasittipap,2013),由于测定持续周期较短(7天),有可能无法检测出死亡率的大幅变化。情况较为严重的EHP感染可能会增加其他细菌感染的易感性。我们发现,在某些情况下,EHP通常伴有弧菌机会性感染(也称为感染性肝胰腺坏死),这可能会导致增加对虾死亡率。
2. java面试题有哪些?
虽然现在大厂内卷现象泛滥,而且996的传统依旧肆虐。但没有哪位程序员能架得住互联网大厂的高薪职位诱惑。特别是我还有一位在阿里工作7年多的老表,在其耳旁风之下,不断将大厂描绘的美丽风景刻画在我脑海中,也让我一直有着想进大厂镀金的梦想。
所以为了完成这次进大厂的梦想,前段时间特意拜托老表爆肝一周之后,才梳理好的这份10W字的“Java高级程序员面试精华题”也帮助我在金三银四的最后时段赶上了跳槽季的末班车,成功入职字节!
虽然金三银四黄金跳槽期虽然已过,如果你现在还想跳槽进入大厂,后面的金九银十也不失为一个好机会。利用这4-5个月的时间里好好储备下技术能力,刷一刷面试题。也为跳槽作一作万全准备。
现在我把这份文档分享出来给每位看到的有缘人,为大家节省一点找资料、翻文献、刷题的时间。
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3. 蜀门神灵蛋的特点?
蜀门神灵蛋怎么获得
最开始的时候50级时在神灵管理员那里能接到一个任务,打45本的BOSS,然后可以从三个神灵里自选一个,都是凡品蛋,攻击属性和评价都是随机的,最高评价是D。 还有就是可以通过打副本,45、55、60、61(这4个本最常见)打宝模式下,击倒BOSS后BOSS会有非常小的概率召唤一个元神,这个元神肯定是该副本中的BOSS元神,至于是哪个就是随机的了。
击倒BOSS元神后会掉落神灵蛋(凡品还是上品看运气)。 最后就是到市场上买了。凡品蛋非常便宜,老区1-3金,新区可能能到8-10金;上品蛋老区也很便宜,大概50金左右,新区比较离谱,100-300不等。
蜀门ol神灵蛋怎么用
得到聚元灵宝后右键打开,然后把神灵蛋拖拽到任意一个框框里就行了。用的时候点下面的“召唤”就能召唤出神灵了。
新蜀门神灵系统养成攻略
1基本条件:50级及以上的玩家可以到成都城的“神灵管理员”(坐标306 -605)处接取神灵系列任务。完成任务后可获得元神法宝“聚元灵宝”、神灵蛋等丰富奖励。要注意的是,玩家必须元神等级达到15级或以上才可完成任务(元神力任务和pve保护头陀任务完成)。
2聚元灵宝的获取:找到“神灵管理员”右键对话,接任务,并免费获取“聚元灵宝”
3:聚元灵宝的装备:将“聚元灵宝”装备在主法宝左侧的装备栏中,即可看到后续任务并得到奖励。然后通过完成45任务可以免费获得一个凡品神灵蛋,右键点击后放入神灵蛋即可。
好品质的神灵蛋:上品神灵,可以通过击杀45、55、60打宝模式副本中的BOSS后,有几率得到。
4:神灵需要设置自动召唤,装备上拥有神灵的聚元灵宝,右击法宝或使用角色→动作里的聚元灵宝快捷键打开聚元灵宝界面选中神灵后,点击召唤按钮即可召出神灵协助玩家战斗(图中所示界面)。
通过召唤神灵,聚元灵宝每1分钟获得6点修为值,通过召唤神灵每天所获得的修为值最多1200点。不推荐使用修为灵丹这种难得的妙丹增加聚元灵宝的修为(除非你着急升级,不惜金钱),
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5:神灵属性点分配:每升一级都将获得5个潜能点,升级神灵的时候注意潜能点的分配,攻击分配有上限,需要注意,不能都分配到攻击上,合理分配到防御上。
6:神灵的外观及属性,其实根据自身喜好即可,和人物无必然关系。凡品神灵的属性评价资质由低至高是F、E、D(凡品最好的也就是DDDD)。而上品神灵的属性评价资质由低至高是E、D、C(上品最好的也就是CCCC)。
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